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NEWS猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书 - 人生就是博-尊龙凯时品牌解读
来源:严聪儿 日期:2025-02-21
通用名：猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Pseudorabies Virus gE (ELISA)
包装规格：96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
伪狂犬病，也称为奥耶斯基氏病（Aujeszky's disease），由伪狂犬病毒（Pseudorabies Virus，PRV）引起，这是一种影响家畜及多种野生动物的急性传染病，主要表现为发热、奇痒、呼吸和神经系统疾病。该病的免疫预防疫苗为gE基因缺失疫苗，因此检测gE蛋白的抗体可用作野毒感染的指标。本试剂盒旨在检测猪血清中的抗伪狂犬病毒gE蛋白抗体，帮助区分临床野毒感染猪与接种gE基因缺失疫苗的猪。
本试剂盒由预包被猪伪狂犬病毒重组gE蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理来检测猪血清或血浆样本中的伪狂犬病毒gE蛋白抗体。在实验过程中，将对照血清和待检样本加入酶标板中，经过温育后，如果样品中含有伪狂犬病毒gE蛋白抗体，便会与板上的抗原结合。经过洗涤去除未结合成分后，接着加入酶标记物进行特异性结合，再次洗涤后加入TMB底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，其显色深浅与样品中特定抗体的含量成正比。最后通过加入终止液使反应停止，并在450nm波长下测定吸光值，以确定样品中是否含有伪狂犬病毒gE蛋白抗体。
试剂盒组成如下：
本试剂盒需在2～8℃保存，保质期为12个月。开封后的包被板应避光保存，防止潮湿，使用期限为2个月。
本试剂盒适用于配备450nm及630nm波长的酶标仪、37℃恒温设备和可调微量移液器。
1. 采用常规方法从动物全血中制备清亮无溶血及污染的血清，样品可在2～8℃保存一周，长期需-20℃保存。
2. 用样品稀释液将待检血清按10倍稀释（例如在稀释板中加入90μl样品稀释液再加10μl血清，并充分混匀）。阴、阳性对照无需稀释。
3. 在使用前将浓缩洗涤液恢复室温并用蒸馏水或去离子水进行20倍稀释，得到工作洗涤液。
1. 在使用前将试剂盒置于室温30分钟以恢复至常温。
2. 取所需数量的酶标板条，设置阴性和阳性对照各2孔，未用的板条需密封保存，2～8℃保存。
3. 在阴、阳性对照孔中加入相应的对照液100μl；在样品孔中加入样品稀释液90μl，再加入稀释后的血清10μl（相当于1:100的稀释比例）。
4. 混匀后盖好盖板膜，置于37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。
5. 淘去孔内液体，向每孔加入350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，并重复洗涤5次，最后一次拍干。
6. 每孔加入酶标记物100μl，盖好盖板膜，重复从第5步开始的洗涤步骤。
7. 向每孔分别加入底物液A和底物液B各50μl，混匀后盖好盖板膜，置于37℃避光反应10分钟。
8. 向每孔加入终止液50μl，混匀后，在450nm（可用630nm作参比波长）下测定各孔的吸光值（A值）。
在正常实验情况下，阴性对照的结果应≤0.10，阳性对照的结果应≥0.60。
1. 样品A值≥0.38为阳性；若样品A值在0.20到0.38之间则为可疑；样品A值＜0.20为阴性。
2. 实验结果显示阳性可能表明该猪受到野毒感染，或是接种了非gE基因缺失疫苗。
本检测结果仅供筛查，不能作为确诊依据。
1. 实验操作时务必佩戴手套、穿工作衣，确保消毒隔离，所有实验废弃物应按传染物处理。
2. 终止液具有腐蚀性，避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3. 酶标板应在恢复至室温后才可开袋，未用完的板条需放入干燥剂的密封袋中保存。
4. 浓缩洗涤液在低温时易结晶，使用前需恢复室温完全溶解。
5. 清洗时确保各孔内加入充足液体，防止未清洗干净的游离酶。
6. 使用的样品应保持新鲜。
7. 实验结果的判定必须以酶标仪的读数为准。
8. 不同批号的试剂组分不得混用。
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