随着细胞治疗领域的迅速扩展，稳定且可重复的诱导多能干细胞（iPSC）扩增成为推动治疗进程的核心所在。通过系统化的生物过程设计，识别并优化关键工艺输入变量（PIVs），我们在PBS垂直轮反应器中成功实现了iPSC扩增的稳健性和可重复性，显著降低了生产成本和周期，从而为大规模生产和临床应用提供了有力保障。

iPSC及其衍生特化细胞的生产流程既复杂又漫长，涉及多个相互依赖的PIVs。对于临床应用所需的大量iPSC衍生细胞（超过10^8个细胞），大规模生物反应器是必不可少的。然而，操作大规模反应器的成本往往高昂，因此在确保细胞产量与质量的前提下，首先必须开发出可在小规模（100-500mL）下重复且稳健的过程。

通过对每个单元操作及单元间过渡过程的详细分析，我们认识到新的PIVs会随之引入。过程输出变量（POVs），如细胞产量、活力、生长速度等，均受到各个PIV影响的总和。在生物工艺开发过程中，PBSBiotech明确了这一关键概念，并通过微缩版的垂直轮（VW）生物反应器（PBS-01和PBS-05Mini）成功开发了一套标准化的iPSC扩增工作流程。这一流程不仅具有高度的稳定性和可重复性，还可轻松扩展至PBS-15，从而极大地提升了iPSC生产的可靠性，有效降低了开发成本，提升了生产效率。

在iPSC制造领域，实验方案和标准化结果报告的不足，造成不同实验室间难以比较多种iPSC培养方法。特别是在3D悬浮培养中，尽管已有研究报告了多项细胞生长性能指标，但这些指标的数值差异较大且缺乏一致性。为了解决这一问题，PBS通过系统化研究关键PIVs的范围，开发了一套基线iPSC扩增协议。该协议旨在确保实验的可复制性和稳健性，并展示出良好的结果一致性与可靠性。经过24次验证，该基线协议用于两种iPSC细胞系（TC-1133和PLX10），并适用于聚集体和微载体培养。

此外，细胞培养协议的详细信息，可以参考相关文献，而生长性能指标方程也已在相关研究中公开。实验结果显示，使用PBS01和PBS05在优化转速下，以适当的细胞密度接种，细胞的平均扩增倍数达993±141倍，这在基因与细胞治疗中显示出极大的潜力。

在iPSC聚集体分化为自然杀伤（NK）免疫细胞的过程中，拟胚体的大小及其密度是重要的PIVs。目前尚未确定最佳的EB大小和密度，但这些PIVs可以通过调整生物反应器的搅拌速率及培养基更换策略有效控制。通过使用相同的PIVs，我们已成功将操作体积从PBS-01的100mL扩展至PBS-15的10L，实现了一致的iPSC生长性能，确保了实验的一致性与可重复性。

为了获得功能性细胞并实现实验的重复性，需要一种能够模拟体内环境的化学成分明确的培养基质。此时，全长的Biolaminin蛋白发挥了重要作用。BioLamina品牌的Biolaminin521在多能干细胞以及分化细胞的培养中展现了强大的有效性，凭借其明确的成分与支持iPSC的生长特性，成为临床应用中不容忽视的选择。若想深入了解更多产品信息，欢迎关注尊龙凯时生物科技，并访问我们的公众号获取更多技术文章！